Kit ELISA CHO HCP
În acest test este utilizată o metodă ELISA cu imunosorbție într-o singură etapă.Probele care conțin CHOK1 HCP reacționează simultan cu anticorpul anti-CHOK1 de capră marcat cu HRP și anticorpul anti-CHOK1 acoperit pe placa ELISA, formând în final un complex sandwich de anticorp marcat cu anticorp în fază solidă-HCP.Antigenul-anticorpul nelegat poate fi îndepărtat prin spălarea plăcii ELISA.Substratul TMB este adăugat în godeu pentru o reacție suficientă.Dezvoltarea culorii este oprită după adăugarea soluției de oprire, iar valoarea DO sau absorbanța soluției de reacție la 450/650 nm este citită cu un cititor de microplăci.Valoarea OD sau valoarea absorbanței este proporțională cu conținutul de HCP din soluție.Din aceasta, concentrația HCP în soluție poate fi calculată conform curbei standard.
Aplicație
Acest kit este utilizat pentru a detecta cantitativ conținutul de reziduuri de proteine ale celulei gazdă CHOK1 din probe.
Coponenţi
| S/N | Componentă | Concentraţie | Conditii de depozitare |
| 1 | Standard CHOK1 HCP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, protejați de lumină |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, protejați de lumină |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Opriți soluția | NA | RT |
| 6 | Sigilanți pentru microplăci | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Plăci de pre-acoperire cu adsorbție mare | NA | 2-8℃ |
Echipament necesar
| Consumabile / Echipamente | Fabricare | Catalog |
| Cititor de microplaci | Dispozitive moleculare | Spectra Max M5, M5e sau echivalent |
| Termomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355 sau echivalent |
| Mixer vortex | IKA | MS3 Digital sau echivalent |
Depozitare și stabilitate
1.Transport la -25~-15°C.
2.Condițiile de depozitare sunt cele prezentate în Tabelul 1;componentele 1-2 sunt depozitate ≤–20°C,5-6 sunt depozitate RT,3、4、7、8 sunt stocate la 2-8℃;perioada de valabilitate este de 12 luni.
Parametrii produsului
1.Sensibilitate: 1ng/ml
2.Interval de detectare: 3-100ng/mL
3.Precizie: CV intra-test ≤ 10%, inter-test CV≤ 15%
4.Acoperire HCP: >80%
5.Specificitate: Acest kit este universal, deoarece reacționează în mod specific cu CHOK1 HCP independent de procesul de purificare.
Prepararea reactivului
1.PBST 0,05%
Luați 15 ml de 20×PBST 0,05%, diluat în ddH2O și se adaugă până la 300 ml.
2.1,0% BSA
Se ia 1 g de BSA din flacon și se diluează în 100 ml de PBST 0,05%, se amestecă bine până se dizolvă complet și se păstrează la 2-8°C.Tamponul de diluție preparat este valabil timp de 7 zile.Se recomandă pregătirea la nevoie.
3.Soluție de detectare 2μg/mL
Luați 48μL de 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP și diluați în 11.952μL de 1% BSA pentru a obține o concentrație finală de 2μg/mL soluție de detectare.
4.QC și pregătirea standardelor CHOK1 HCP
| Tub Nu. | Original | Concentraţie | Volum | 1% BSA | volum total | Final |
| A | Standard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabel: Pregătirea QC și standarde
Procedura de testare
1.Pregătiți reactivii așa cum este indicat în „Pregătirea reactivului” de mai sus.
2.Luați 50μL de standarde, probe și QC (consultați Tabelul 3) în fiecare godeu, apoi adăugați 100μL de soluție de detectare (2μg/mL);Acoperiți placa cu sigilant și puneți placa ELISA pe termomixer.Incubați la 500rpm, 25±3℃ timp de 2 ore.
3.Întoarceți microplaca în chiuvetă și aruncați soluția de acoperire.Se pipetează 300μL de PBST 0,05% în fiecare godeu pentru a spăla placa ELISA și se aruncă soluția și se repetă spălarea de 3 ori.Rasturnați farfuria pe un prosop de hârtie curat și uscați.
4.Adăugați 100 μL de substrat TMB (a se vedea tabelul 1) în fiecare godeu, sigilați placa ELISA și incubați la întuneric la 25±3℃ timp de 15 minute.
5.Se pipetează 100μL de soluție de oprire în fiecare godeu.
6.Măsurați absorbanța la lungimea de undă de 450/650nm cu cititorul de microplăci.
7.Analizați datele prin SoftMax sau software echivalent.Trasează curba standard utilizând un model de regresie logistică cu patru parametri.
Exemplu de curbă standard
NOTĂ: Dacă concentrația de HCP din probă depășește limita superioară a curbei standard, acesta trebuie diluat corespunzător cu tampon de diluție înainte de testare.
NOTE
Soluția de oprire este acid sulfuric 2M, vă rugăm să manipulați cu grijă pentru a evita stropirea!
