ADNza I
ADNaza I (Deoxiribonucleaza I) este o endodezoxiribonuclează care poate digera ADN-ul monocatenar sau dublu.Recunoaște și scindează legăturile fosfodiester pentru a produce monodeoxinucleotide sau oligodeoxinucleotide monocatenare sau dublu catenare cu grupări fosfat la 5′-terminal și hidroxil la 3′-terminal.Activitatea ADNazei I depinde de Ca2+ și poate fi activată de ionii metalici divalenți precum Mn2+ și Zn2+.5mM Ca2+ protejează enzima de hidroliză.În prezența Mg2+, enzima ar putea recunoaște și scinda aleatoriu orice site de pe orice catenă de ADN.În prezența Mn2+, catenele duble de ADN pot fi simultan recunoscute și scindate aproape în același loc pentru a forma fragmente de ADN cu capăt plat sau fragmente de ADN cu capăt lipicios cu 1-2 nucleotide proeminente.
Proprietatea produsului
ADNza I pancreasului bovin a fost exprimată în sistemul de exprimare a drojdiei și purificată.
Coponenţi
| Componentă | Volum | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| ADNza I, fără RNază | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNază I tampon | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transport și depozitare
1. Stabilitate la depozitare: – 15℃~-25℃ pentru depozitare;
2.Stabilitatea transportului: Transport sub pachete de gheață;
3. Furnizat în: 10 mM Tris-HCI, 2 mM CaCI2, 50% glicerol, pH 7,6 la 25℃.
Definiția unității
O unitate este definită ca cantitatea de enzimă care va degrada complet 1 ug de ADN pBR322 în 10 minute la 37°C.
Control de calitate
RNază:5U de ADNază I cu 1,6 μg MS2 ARN timp de 4 ore la 37 ℃ nu produce nicio degradare, așa cum s-a determinat prin electroforeză pe gel de agaroză.
Bacterian Endotoxina:Testul LAL, conform Farmacopeei Chineze IV ediția 2020, metoda de testare a limitei gelului, regula generală (1143).Conținutul de endotoxine bacteriene trebuie să fie ≤10 EU/mg.
Instructiuni de folosire
1.Pregătiți soluția de reacție în tubul fără RNază conform proporțiilor enumerate mai jos:
| Componentă | Volum |
| ARN | X μg |
| 10 × tampon ADNază I | 1 μL |
| ADNază I, fără RNază (5U/μL) | 1 U per μg ARN |
| ddH2O | Până la 10 μL |
2,37 ℃ timp de 15 minute;
3.Adăugați tampon de terminare pentru a opri reacția și încălziți la 65℃ timp de 10 minute pentru a inactiva ADNaza I. Proba poate fi utilizată direct pentru următorul experiment de transcripție.
Note
1.Utilizați 1U ADNază I per μg de ARN sau 1U ADNază I pentru mai puțin de 1μg de ARN.
2.EDTA trebuie adăugat la o concentrație finală de 5 mM pentru a proteja ARN-ul de a fi degradat în timpul inactivării enzimatice.
