UNG sensibil la temperatură
UNG sensibil la temperatură (TS-UNG) este o substanță obținută prin expresie recombinantă în E. coli.Enzima catalizează eliberarea de uracil liber din ADN-ul simplu și dublu catenar care conține uracil și este inactivă împotriva ARN-ului.În comparație cu enzima UNG convențională de origine a genei E. coli, enzima TS-UNG are activitate mai mare la temperaturi scăzute (20℃~37℃) și este sensibilă la temperatură și ușor inactivată (50℃), evitând degradarea amplificării care conțin dUTP. produse la temperatura camerei prin activitatea reziduală care poate rămâne după inactivarea enzimei UNG convenționale.Prin urmare, enzima TS-UNG nu este potrivită numai pentru reacția de prevenire a contaminării prin PCR, ci se potrivește bine cu programul de amplificare RT-PCR și poate fi utilizată în reacția de prevenire a contaminării RT-PCR.
Aplicație recomandată
Prevenirea contaminarii Amplificare
Starea de depozitare
-20°C pentru depozitare pe termen lung, trebuie amestecat bine înainte de utilizare, evitați înghețarea-dezghețarea frecventă.
Buffer de stocare
20 mM Tris-HCI (pH 7,5), 100 mM NaCI, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizator, 50% glicerol.
Definiția unității
Cantitatea de enzimă necesară pentru a degrada 1 pg de ADN monocatenar care conține baze dU în 1 oră la 37°C este de 1 unitate de activitate (U).
Control de calitate
1.puritate electroforetică SDS-PAGE mai mare de 98%
2.Activitate de degradare, control lot la lot, stabilitate
3.Fără activitate de nuclează exogenă, fără endonuclează exogenă sau contaminare cu exonuclează.
Instrucțiuni
| Componente | Volumul (μL) | Concentrarea finală |
| 10 × tampon PCR (fără dNTP, Mg²+gratuit) | 5 | 1× |
| dUTP-uri (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (înlocuiește dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCI2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5U) |
| 25 × amestec de amorsareA | 2 | 1× |
| Șablon | - | ＜1μg/reacție |
| ddH₂O | Până la 50 | - |
Notă: a: Dacă este utilizată pentru qPCR/qRT-PCR, sonda fluorescentă trebuie adăugată în sistemul de reacție.De obicei, o concentrație finală de primer de 0,2 μM poate da rezultate bune;când performanța reacției este slabă, concentrația primerului poate fi ajustată în intervalul 0,2-1 μM.De obicei, concentrația sondei este optimizată în intervalul 0,1-0,3 μM.Pot fi efectuate experimente cu gradient de concentrație pentru a găsi cea mai bună combinație de primer și sondă.
Note
1.Temperatura optimă de reacție a enzimei TS-UNG este relativ scăzută și poate fi optimizată în intervalul 20℃~37℃, doza de enzimă și timpul de reacție pot fi optimizate în intervalul 0,1~0,5 U, 5~ 10 minute;iar enzima poate fi inactivată în procesul de transcriere inversă.
2.Este potrivit pentru PCR și RT-PCR pentru a preveni contaminarea.
3.Evitați înghețul-dezghețul frecvent și nu expuneți la fluctuații mari de temperatură.
4.Diferitele gene care urmează să fie amplificate au o eficiență diferită de utilizare a dUTP și sensibilitate la enzima UNG, prin urmare, dacă utilizarea sistemului UNG duce la o scădere a sensibilității de detectare, sistemul de reacție ar trebui ajustat și optimizat, dacă aveți nevoie de suport tehnic, vă rugăm să contactați compania noastră.
