Ultra Nuclează
UltraNuclease este o dendonuclaază derivată din Serratia marcescens, care este capabilă să degradeze ADN-ul sau ARN-ul, fie dublu sau simplu catenar, liniar sau circular într-o gamă largă de condiții, degradează complet acizii nucleici în oligonucleotide 5'-monofosfat cu lungime de 3-5 baze. .După modificarea ingineriei genetice, produsul a fost fermentat, exprimat și purificat în Escherichia coli (E. coli), ceea ce reduce vâscozitatea supernatantului celular și cercetarea neștiințifică a lizatului celular, dar și îmbunătățește eficiența purificării și cercetarea funcțională a proteinelor.De asemenea, poate fi utilizat în terapia genică, purificarea virusului, producția de vaccinuri, industria farmaceutică de proteine și polizaharide ca reactiv de îndepărtare a acidului nucleic reziduu gazdă.
Caracteristicile produsului
| CAS Nr. | 9025-65-4 |
| EC nr. | |
| Greutate moleculară | 30 kDa |
| Punct izoelectric | 6,85 |
| Puritatea proteinelor | ≥99% (SDS-PAGE și SEC-HPLC) |
| Activitate specifică | ≥1.1×106U/mg |
| Temperatură optimă | 37°C |
| pH optim | 8.0 |
| ProteazăActivitate | negativ |
| Povara biologică | ＜10 CFU/100.000U |
| Proteină reziduală a celulei gazdă | ≤10 ppm |
| Metal greu | ≤10 ppm |
| Endotoxină bacteriană | ＜0,25EU/1000U |
| Buffer de stocare | 20 mM Tris-HCI, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glicerol |
Conditii de depozitare
≤0°C transport；-25~-15°C Depozitare, valabilitate 2 ani (evitați înghețarea-dezghețarea).
Definiția unității
Cantitatea de enzimă utilizată pentru a modifica valoarea de absorbție a △A260 cu 1,0 în 30 de minute la 37 ° C, pH 8,0, echivalent cu 37 μg ADN de spermă de somon digerat prin tăierea în oligonucleotide, a fost definită ca o unitate activă (U).
Control de calitate
Proteină reziduală a celulei gazdă: trusa ELISA
•Proteaza Reziduuri: 250KU/mL UltraNuclease a reacţionat cu substratul timp de 60 min, nu a fost detectată nicio activitate.
•Endotoxină bacteriană: LAL-Test, Farmacopeea Republicii Populare Chineze Volumul 4 (Ediția 2020) metoda de testare a limitei gelului.Reguli generale (1143).
•Povara biologica: Farmacopeea Republicii Populare Chineze Volumul 4 (Ediția 2020) — General
Reguli pentru Testul de Sterilitate (1101), Standardul Național PRC, GB 4789.2-2016.
•Metal greu:ICP-AES, HJ776-2015.
Operațiune
Activitatea UltraNuclease a fost inhibată semnificativ atunci când concentrația SDS a fost peste 0,1% sau EDTA
concentrația a fost peste 1 mM. Surfactantul Triton X-100, Tween 20 și Tween 80 nu au avut niciun efect asupra nucleazei
proprietăți atunci când concentrația a fost sub 1,5%.
| Operațiune | Funcționare optimă | Operațiune valabilă |
| Temperatura | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| TDT | 0-100 mM | >100mM |
| 2-Mercaptoetanol | 0-100 mM | >100mM |
| Ion metalic monovalent （Na+, K+ etc.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Utilizare și dozare
• Îndepărtați acidul nucleic exogen din produsele vaccinale, reduceți riscul de toxicitate reziduală a acidului nucleic și îmbunătățiți siguranța produsului.
• Reduceți vâscozitatea lichidului de alimentare cauzată de acidul nucleic, scurtați timpul de procesare și creșteți randamentul proteic.
• Îndepărtați acidul nucleic care a înfășurat particula (virus, corp de incluziune, etc.), care este propice
la eliberarea și purificarea particulei.
| Tipul experimental | Producția de proteine | Virus, vaccin | Droguri celulare |
| Număr de celule | 1 g greutate celule umede (resuspendat cu 10 ml tampon) | Fermentare 1L supernatant lichid | Cultură 1L |
| Doza minima | 250U | 100U | 100U |
| Dozaj recomandat | 2500U | 25000U | 5000U |
• Tratamentul cu nuclează poate îmbunătăți rezoluția și recuperarea probei pentru cromatografia pe coloană, electroforeză și analiză prin blotting.
• În terapia genică, acidul nucleic este îndepărtat pentru a obține virusuri adeno-asociate purificate.
