BspQI
BspQI poate fi exprimat recombinant în E. coli care poate recunoaște situsuri specifice și sunt produse sub
BspQI, o endonuclează de restricție a endonucleazei de restricție IIs, este derivată dintr-o tulpină de E. coli recombinantă care poartă genul BspQI donat și modificat de la Bacillus sphaericus.Poate recunoaște site-uri specifice, iar secvența de recunoaștere și site-urile de clivaj sunt după cum urmează:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
caracteristicile produsului
1. Activitate mare, Digestie rapida;
2. Activitate scăzută a stelei, asigurând tăierea precisă precum „bisturiul”;
3. Fără BSA și fără origine animală;
Sensibilitatea la metilare
Dsunt metilare:Nu este sensibil;
Dcm metilare:Nu este sensibil;
Metilarea CpG:Nu este sensibil;
Conditii de depozitare
Produsul trebuie expediat ≤ 0℃;A se păstra la -25~- 15℃.
Buffer de stocare
20 mM Tris-HCI, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCI, 1,0 mM ditiotreitol, 500 ug/ml Albumină recombinată, 0,1% Trition X-100 şi 50% glicerol (pH 7,0 la 25°C).
Definiția unității
O unitate este definită ca cantitatea de enzimă necesară pentru a digera 1 pg de ADN de control intern într-o oră la 50°C într-un volum total de reacție de 50 pL.
Control de calitate
Testul de puritate a proteinei (SDS-PAGE):Puritatea BspQI a fost ≥95% determinată prin analiza SDS-PAGE.
RNază:10U de BspQI cu 1,6 μg MS2 ARN timp de 4 ore la 50℃ nu produce nicio degradare, așa cum s-a determinat prin electroforeză pe gel de agaroză.
Activitate nespecifică a ADNazei:10U de BspQI cu 1 μg λ ADN la 50 ℃ timp de 16 ore, în comparație cu 50 ℃ timp de 1 oră, nu produc ADN în exces, așa cum este determinat prin electroforeză pe gel de agaroză.
Ligare și tăiere:După digestia a 1 μg λDNA cu 10U BspQI, fragmentele de ADN pot fi ligate cu ADN ligază T4 la 16ºC.Și aceste fragmente ligate pot fi recupate cu BspQI.
E coli ADN: Detectarea qPCR TaqMan specifică ADNr-ului E. coli 16s a arătat că restul genomului E.coli ≤ 0,1 pg/ul.
Rezidu de proteină gazdă:≤ 50 ppm
Bacterian Endotoxina: Testul LAL, conform Farmacopeei Chineze IV ediția 2020, metoda de testare a limitei gelului, regula generală (1143).Conținutul de endotoxine bacteriene trebuie să fie ≤10 EU/mg.
Sistem de reacție și condiții
| Componentă | Volum |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| ADN | 1 μg |
| 10 x BspQ I tampon | 5 μL |
| dd H2O | Până la 50 μL |
Condiții de reacție: 50℃, 1 ~ 16 ore.
Inactivare la căldură: 80°C timp de 20 min.
Sistemul de reacție și condițiile recomandate pot oferi un efect relativ bun de digestie a enzimelor, care este doar pentru referință, vă rugăm să consultați rezultatele experimentale pentru detalii.
Aplicarea produsului
Digestia endonucleazei de restricție, Clonarea rapidă.
Note
1. Volumul enzimei ≤ 1/10 din volumul de reacție.
2. Activitatea stelei poate apărea atunci când concentrația de glicerol este mai mare de 5%.
3. Activitatea de scindare poate apărea când substratul este sub raportul recomandat.
