M-MLV Neoscript Reverse Transcriptaza

Neoscript Reverse Transcriptase este o revers transcriptază obținută prin screening-ul mutațiilor genei M-MLV de originea virusului leucemiei murine Moloney și expresia în E.coli.Enzima elimină activitatea RNazei H, are toleranță mai mare la temperatură și este potrivită pentru transcripția inversă la temperatură înaltă.Prin urmare, este util pentru eliminarea efectelor nefavorabile ale structurii de nivel înalt a ARN și ale factorilor nespecifici asupra sintezei ADNc și are o stabilitate mai mare și o capacitate de sinteză a transcripției inverse.Enzima are o stabilitate mai mare și o capacitate de sinteză inversă a transcripției.

Componente

1.200 U/μL Neoscript Reverse Transcriptaza

2.5 × First-Strand Buffer (opțional)

* 5 × First-Strand Buffer nu conține dNTP, vă rugăm să adăugați dNTP-uri când pregătiți sistemul de reacție

Aplicație recomandată

1.qRT-PCR într-un singur pas.

2.Detectarea virusului ARN.

Starea de depozitare

-20°C pentru depozitare pe termen lung, trebuie amestecat bine înainte de utilizare, evitați înghețarea-dezghețarea frecventă.

Definiția unității

O unitate încorporează 1 nmol de dTTP în 10 minute la 37°C utilizând poli(A)•oligo(dT)₂₅ca șablon/grund.

Control de calitate

1.Puritate electroforetică SDS-PAGE mai mare de 98%.

2.Sensibilitate de amplificare, control lot la lot, stabilitate.

3.Fără activitate de nuclează exogenă, fără endonuclează exogenă sau contaminare cu exonuclează

Configurarea reacției pentru prima soluție de reacție în lanț

1.Prepararea amestecului de reacție

Note:a/b: Vă rugăm să selectați diferite tipuri de grunduri în funcție de nevoile dumneavoastră experimentale.

2.Se încălzește la 65°C timp de 5 minute și se răcește rapid pe gheață timp de 2 minute.

3.Adăugați următoarele componente în sistemul de mai sus la un volum total de 20µL și amestecați ușor:

4. Vă rugăm să efectuați reacția în conformitate cu următoarele condiții:

(1) Dacă se folosește Primer aleatoriu, reacția trebuie efectuată la 25 ℃ timp de 10 minute, apoi la 50 ℃ timp de 30 ~ 60 de minute;

(2) Dacă se utilizează Oligo dT sau primeri specifici, reacția trebuie efectuată la 50 ℃ timp de 30 ~ 60 de minute.

5.Se încălzește la 95 ℃ timp de 5 minute pentru a inactiva Neoscript Reverse Transcriptaza și a opri reacția.

6.Produsele de transcripție inversă pot fi utilizate direct în reacția PCR și reacția PCR cantitativă de fluorescență sau stocate la -20℃ pentru o lungă perioadă de timp.

PCR Ractiune:

1.Prepararea amestecului de reacție

Note:a: Dacă se adaugă prea multă soluție pentru prima reacție în lanț, reacția PCR poate fi inhibată.

2.Procedura de reacție PCR

Note

1.Potrivit pentru optimizarea temperaturii de transcriere inversă în intervalul 42℃ ~ 55℃.

2.Are o stabilitate mai bună, este potrivit pentru amplificarea cu transcripție inversă la temperatură ridicată.În plus, este favorabil pentru trecerea eficientă prin regiuni structurale complexe ale ARN.De asemenea, acestaeste potrivit pentru detectarea cantitativă RT-PCR cu fluorescență multiplex într-un singur pas.

3.Compatibilitate bună cu diverse enzime de amplificare PCR și este potrivit pentru reacții RT-PCR cu sensibilitate ridicată.

4.Potrivit pentru reacția cantitativă RT-PCR cu fluorescență într-un singur pas cu sensibilitate ridicată, îmbunătățește eficient rata de detectare a concentrației scăzute de șabloane.

5.Potrivit pentru construcția bibliotecii de ADNc.