Warm Start Bst 2.0 ADN polimerază (fără glicerol)
Bst ADN polimeraza V2 este derivată din Bacillus stearothermophilus ADN polimeraza I, care are activitate de ADN polimerază 5′→3′ și activitate puternică de înlocuire a lanțului, dar nu are activitate exonuclează 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 este ideal pentru deplasarea catenei, amplificarea izotermă LAMP (amplificare izotermă mediată în buclă) și secvențierea rapidă.Bst DNA polimeraza V2 este o versiune cu pornire la cald bazată pe Bst DNA polimerază V2 (HC5005A) obținută prin tehnologia de modificare reversibilă, care poate inhiba activitatea ADN polimerazei la temperatura camerei, astfel încât sistemul de reacție poate fi operat și formulat la temperatura camerei pentru a preveni -amplificare specifică și îmbunătățirea eficienței reacției, iar această versiune poate fi liofilizată.În plus, activitatea sa este eliberată la temperaturi ridicate, deci nu este nevoie de un pas de activare separat.
Componente
| Componentă | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst ADN polimerază V2 (fără glicerol) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 tampon | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2×10 ml |
Aplicații
1.Amplificare izotermă LAMPĂ
2.Reacție cu deplasare unică a catetei de ADN
3.Secvențiere ridicată a genei GC
4.Secvențierea ADN-ului la nivel de nanogramă.
Starea de depozitare
Transport sub 0°C și păstrat la -25°C~-15°C.
Definiția unității
O unitate este definită ca cantitatea de enzimă care încorporează 25 nmol de dNTP în material insolubil în acid în 30 de minute la 65°C.
Control de calitate
1.Testul de puritate a proteinei (SDS-PAGE):Puritatea ADN polimerazei Bst V2 este ≥99% determinată prin analiza SDS-PAGE utilizând detectarea Coomassie Blue.
2.EndonucleazaActivitate:Incubarea unei reacții de 50 μL care conține minimum 8 U de ADN polimerază Bst V2 cu 1 μg λADN timp de 16 ore la 37 ℃ nu duce la nicio degradare detectabilă, după cum s-a determinat.
3.Activitatea exonucleazei:Incubarea unei reacții de 50 μL care conține minimum 8 U de ADN polimerază Bst V2 cu 1 μg λ -Hind Ⅲ ADN digerat timp de 16 ore la 37 ℃ nu duce la nicio degradare detectabilă, după cum s-a determinat.
4.Activitate Nickase:Incubarea unei reacții de 50 μL care conține minimum 8 U de ADN polimerază Bst V2 cu 1 μg ADN pBR322 timp de 16 ore la 37°C nu are ca rezultat o degradare detectabilă, după cum s-a determinat.
5.Activitatea RNazelor:Incubarea unei reacții de 50 μL care conține minimum 8 U de ADN polimerază Bst V2 cu 1,6 μg ARN MS2 timp de 16 ore la 37°C nu are ca rezultat o degradare detectabilă, după cum s-a determinat.
6.E coliADN:120 U de ADN polimerază Bst V2 sunt analizate pentru prezența ADN-ului genomic de E. coli utilizând qPCR TaqMan cu primeri specifici pentru locusul ARNr 16S de E. coli.Contaminarea ADN-ului genomic cu E. coli este ≤1 copie.
Reacția LAMPĂ
| Componente | 25μL |
| 10×HC Bst V2 tampon | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP-uri (10 mM fiecare) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 verde (25×)a | 1,0 μL |
| Amestecul de grundb | 6 μL |
| Bst ADN polimerază V2 (fără glicerol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Șablon | × μL |
| ddH₂O | Până la 25 μL |
Note:
1) a.SYTOTM 16 Verde (25×): În funcție de nevoile experimentale, se pot folosi și alți coloranți ca înlocuitori;
2) b.Amestecul de amorsare: obținut prin amestecarea a 20 uM FIP, 20 uM BIP, 2,5 uM F3, 2,5 uM B3, 5 uM LF, 5 uM LB și alte volume.
Reacție și condiție
1 × HC Bst V2 Buffer, temperatura de incubare este între 60°C și 65°C.
Inactivarea căldurii
80°C, 20 minute
