Bst 2.0 ADN polimerază (fără glicerol)
Bst ADN polimeraza V2 este derivată din Bacillus stearothermophilus ADN polimeraza I, care are activitate de ADN polimerază 5′→3′ și activitate puternică de înlocuire a lanțului, dar nu are activitate exonuclează 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 este ideal pentru deplasarea catenei, amplificarea izotermă LAMP (amplificare izotermă mediată în buclă) și secvențierea rapidă.
Componente
| Componentă | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimeraza V2 (fără glicerol) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 tampon | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2×10 ml |
Aplicații
1.Amplificare izotermă LAMPĂ
2.ADN reacție cu deplasare unică
3.Secvențierea genelor GC înalt
4.Secvențierea ADN la nivel de nanogramă.
Starea de depozitare
Transport sub 0°C și păstrat la -25°C~-15°C.
Definiția unității
O unitate este definită ca cantitatea de enzimă care încorporează 25 nmol de dNTP în material insolubil în acid în 30 de minute la 65°C.
Control de calitate
1.Testul de puritate a proteinei (SDS-PAGE):Puritatea ADN polimerazei Bst V2 este ≥99% determinată prin analiza SDS-PAGE utilizând detectarea Coomassie Blue.
2.Activitatea exonucleazei:Incubarea unei reacții de 50 μL care conține minimum 8 U de ADN polimerază Bst V2 cu 1 μg λ -Hind Ⅲ ADN digerat timp de 16 ore la 37 ℃ nu duce la nicio degradare detectabilă, după cum s-a determinat.
3.Activitate Nickase:Incubarea unei reacții de 50 μL care conține minimum 8 U de ADN polimerază Bst V2 cu 1 μg ADN pBR322 timp de 16 ore la 37°C nu are ca rezultat o degradare detectabilă, după cum s-a determinat.
4.Activitatea RNazelor:Incubarea unei reacții de 50 μL care conține minimum 8 U de ADN polimerază Bst V2 cu 1,6 μg ARN MS2 timp de 16 ore la 37°C nu are ca rezultat o degradare detectabilă, după cum s-a determinat.
5.ADN-ul E. coli:120 U de ADN polimerază Bst V2 sunt analizate pentru prezența ADN-ului genomic de E. coli utilizând qPCR TaqMan cu primeri specifici pentru locusul ARNr 16S de E. coli.Contaminarea ADN-ului genomic cu E. coli este ≤1 copie.
Reacția LAMPĂ
| Componente | 25μL |
| 10×HC Bst V2 tampon | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP-uri (10 mM fiecare) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 verde (25×)a | 1,0 μL |
| Amestecul de grundb | 6 μL |
| Bst ADN polimerază V2 (fără glicerol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Șablon | × μL |
| ddH₂O | Până la 25 μL |
Note:
1) a.SYTOTM 16 Verde (25×): În funcție de nevoile experimentale, se pot folosi și alți coloranți ca înlocuitori;
2) b.Amestecul de amorsare: obținut prin amestecarea a 20 uM FIP, 20 uM BIP, 2,5 uM F3, 2,5 uM B3, 5 uM LF, 5 uM LB și alte volume.
Reacție și condiție
1 × HC Bst V2 Buffer, temperatura de incubare este între 60°C și 65°C.
Inactivarea căldurii
80 °C, 20 minute
