ADNza I (Fără Rnază) (5u/ul)
Cat No: HC4007A
ADNaza I (Deoxiribonucleaza I) este o endodezoxiribonuclează care poate digera ADN-ul monocatenar sau dublu.Recunoaște și scindează legăturile fosfodiester pentru a produce monodeoxinucleotide sau oligodeoxinucleotide monocatenar sau dublu cu grupări fosfat la 5’-terminal și hidroxil la 3’-terminal.Activitatea ADNazei I depinde de Ca2+și poate fi activat de ioni metalici divalenți precum Mn2+şi Zn2+.5 mM Ca2+protejează enzima de hidroliză.În prezența Mg2+, enzima ar putea recunoaște și scinda aleatoriu orice site de pe orice catenă de ADN.În prezența lui Mn2+, catenele duble de ADN pot fi simultan recunoscute și scindate aproape în același loc pentru a forma fragmente de ADN cu capăt plat sau fragmente de ADN cu capăt lipicios cu 1-2 nucleotide proeminente.
Componente
| Nume | 0,1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| ADNza I, fără RNază | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNază I tampon | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Conditii de depozitare
-25℃~-15℃ pentru depozitare;Transport sub pachete de gheață.
Instrucțiuni
1. Pregătiți soluția de reacție în tubul fără RNază conform proporțiilor enumerate mai jos:
| Componentă | Volum |
| ARN | X ug |
| 10 × tampon ADNază I | 1μL |
| ADNază I, fără RNază (5U/μL) | 1 U per ug ARN① |
| ddH2O | Până la 10μL |
Notă: ①Calculați volumul de DNază I care trebuie adăugat pe baza cantității de ARN.
2. 37 ℃ timp de 15 minute;
3. Adăugați 0,5M EDTA la concentrația finală de 2,5mM~5mM și încălziți la 65℃ timp de 10 minute pentru a opri reacția.Proba poate fi utilizată direct pentru următoarea reacție, cum ar fi transcrierea inversăexperiment.
Definiția unității
O unitate este definită ca cantitatea de enzimă care va degrada complet 1 ug de pBR322ADN în 10 minute la 37℃.
Control de calitate
RNază:5U de ADNază I cu 1,6 ug MS2 ARN timp de 4 ore la 37℃ nu produce degradare, deoarecedeterminată prin electroforeză pe gel de agaroză.
Note
1. Vă rugăm să pregătiți singur 0,5MEDTA.
2. Utilizați 1U ADNază I per µg de ARN.Cu toate acestea, dacă ARN-ul este mai mic de 1 µg, vă rugăm să utilizați 1U ADNază I.
3. Vă rugăm să puneți enzima pe gheață în timpul funcționării.
