Superstart qPCR Premix plus-UNG
Cat No: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG este un reactiv specializat proiectat pentru reacții calitative și cantitative PCR în timp real folosind detecția pe bază de sondă, dezvoltat special pentru procesele de liofilizare.Conține o nouă enzimă de pornire la cald Hotstart Taq plus (DG), care are activitatea sa enzimatică Taq sigilată la temperatura camerei, inhibând eficient amplificarea nespecifică cauzată de recoacere nespecifică a primerului sau de formarea dimerului de primer în condiții de temperatură scăzută, îmbunătățind astfel specificitatea reacţiei de amplificare.Acest reactiv folosește un tampon specific qPCR optimizat și un sistem anti-contaminare UNG/dUTP pentru a obține o pornire rapidă la cald, îmbunătățind considerabil eficiența și sensibilitatea reacțiilor qPCR.Poate obține curbe standard bune într-o gamă largă de zone de cuantificare și poate efectua cu precizie cuantificarea, prevenind eficient amplificarea fals pozitivă cauzată de produsele PCR reziduale sau contaminarea cu aerosoli.Acest reactiv este compatibil cu majoritatea instrumentelor PCR cantitative fluorescente de la producători precum Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad și Roche etc. și prezintă o stabilitate bună în formă liofilizată.
Compoziția reactivului
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratuit) (DG)
2. 250 mM MgCI2
3. 4 × lioprotector (opțional)
Conditii de depozitare
Depozitare pe termen lung la -20℃;poate fi păstrat la 4℃ timp de până la 3 luni.Se amestecă bine înainte de utilizare șievitați înghețarea și decongelarea repetată.
Protocol de ciclism
| Procedură | Temp. | Timp | Ciclu |
| Digestie | 50℃ | 2 min | 1 |
| Activarea polimerazei | 95℃ | 1~5 min | 1 |
| Denatura | 95℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Recoacerea și extinderea | 56~64℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR lichid de reacție SyPrepararea tulpinii
|
Compoziţie |
Volum 25 µL |
Volum 50 µL |
Concentrarea finală |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+gratuit) (DG) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| 250 mM MgCI2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mM |
| 4 × lioprotector1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25×Amestec amorsare-sondă2 | 1 µL | 2 µL | 1× |
| ADN șablon3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Până la 25 µL | Până la 50 µL | —— |
1. O concentrație finală de 0,2μM pentru primeri dă de obicei rezultate bune;când performanța reacției este slabă, ajustați concentrația primerului în intervalul 0,2-1μM, după cum este necesar.Concentrația sondei este de obicei optimizată în intervalul 0,1-0,3μM prin experimente cu gradient pentru a găsi combinații optime.
2. Numărul de copii ale genelor țintă conținute în diferite tipuri de șabloane variază;dacă este necesar, se poate efectua diluția cu gradient pentru a determina cantitatea optimă de adăugare a șablonului.
3. Acest sistem poate fi liofilizat;atunci când clienții folosesc acest sistem fără cerințe de uscare prin congelare, se pot adăuga selectiv 4 × lioprotector; dacă sunt necesare produse liofilizate, în timpul etapei de validare a performanței produsului cu reactivi lichizi, trebuie să adauge 4 × lioprotector pentru a asigura coerența cu componentele sistemului liofilizat. si efecte.
Când sistemul este utilizatd pentru liofilizare, se prepară sistem as ca urmare a:
| Compoziţie | 25µL Sistem de reacție |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratuit) (DG) | 5 µL |
| 250 mM MgCI2 | 0,45 µL |
| 4 × lioprotector | 6,25 µL |
| 25×Amestec amorsare-sondă | 1 µL |
| ddH2O | Până la 18~20µL |
* Dacă sunt necesare alte sisteme pentru uscare prin congelare, vă rugăm să consultați separat.
Procesul de liofilizaress
| Procedură | Temp. | Timp | Condiție | Presiune |
| Pre-congelare | 4℃ | 30 minute | Ține |
1 atm |
| -50℃ | 60 min | Răcire | ||
| -50℃ | 180 min | Ține | ||
| Uscarea primară | -30℃ | 60 min | Incalzi |
Vacuum suprem |
| -30℃ | 70 min | Ține | ||
| Uscarea secundară | 25℃ | 60 min | Incalzi |
Vacuum suprem |
| 25℃ | 300 min | Ține |
2. Procesul de liofilizare de mai sus este doar pentru referință.Diferite tipuri de produse și diferite liofilitoare au parametri diferiți, astfel încât ajustările pot fi făcute în funcție de situația reală.condiţiile de utilizare.
3. Diferite procese de liofilizare pot fi potrivite pentru diferite dimensiuni de lot de liofilizareproduse, deci trebuie efectuată o validare suficientă a testelor atunci când sunt utilizate pentru producție la scară largă.
Instrucțiuni pentru utilizarea liofilizeid pulbere
1. Centrifugați scurt pulberea liofilizată;
2. Adăugați șablonul de acid nucleic la pulberea liofilizată și adăugați apă până la 25µL;
3. Se amestecă bine prin centrifugare și se rulează pe mașină.
Control de calitate:
1. Testarea funcțională: sensibilitatea, specificitatea, reproductibilitatea qPCR.
2. Fără activitate nuclează exogenă, fără contaminare exogenă endo/exonuclează.
Informații tehnice:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG utilizează o nouă enzimă de pornire la cald care permite pornirea rapidă la cald în 1 ~ 5 minute;prin formularea tampon specială este potrivit pentru reacții PCR cantitative fluorescente multiplex.
2. Are o specificitate mai mare care îmbunătățește semnificativ sensibilitatea detectării limitei PCR cantitative de fluorescență, realizând normalizarea curbelor de amplificare, valoarea fluorescenței obține o îmbunătățire evidentă la șabloane de concentrație scăzută, potrivite ca reactivi de detecție PCR cantitativi de fluorescență cu sensibilitate ridicată.
3. Pentru primeri cu temperatură de recoacere mai mică sau cu fragmente mai lungi de 200 bp, se recomandă metoda în 3 etape.
4. Eficiența de utilizare a dUTP și sensibilitatea la enzima UNG diferă pentru diferite gene țintă, prin urmare, dacă utilizarea sistemului UNG duce la o scădere a sensibilității de detectare, sistemul de reacție ar trebui ajustat și optimizat.Dacă este necesar suport tehnic, vă rugăm să contactați compania noastră.
5. Folosiți zone și pipete dedicate înainte și după amplificare, purtați mănuși în timpul funcționării și înlocuiți-le frecvent;nu deschideți tubul de reacție după terminarea PCR pentru a minimiza contaminarea probelor cu produsele PCR.
