Multiplex qPCR Probe Premix
Cat Nr: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (pe bază de colorant) este o pre-soluție pentru amplificarea PCR cantitativă de 2 × în timp real, caracterizată prin sensibilitate și specificitate ridicate, care este de culoare albastră și are efectul de adăugare a probei.Acest produs este un reactiv preamestec 2× Mix care permite până la patru reacții PCR cantitative fluorescente într-un singur godeu de reacție.Acest produs conține metoda anticorpilor modificați genetic pentru pornirea la cald a enzimei Taq, îmbunătățind considerabil sensibilitatea și specificitatea de amplificare.În același timp, acest produs a optimizat profund tamponul multi-reacție, care poate îmbunătăți eficiența de amplificare a reacției și poate promova amplificarea eficientă a șablonelor cu concentrație scăzută.Acest produs poate fi utilizat pentru genotipare și analiză cantitativă multiplex.
Specificație
| Hot Start | Pornire la cald încorporată |
| Metoda de detectare | Detectare amorsare-sondă |
| Metoda PCR | qPCR |
| Polimeraza | Taq ADN polimeraza |
| Tipul eșantionului | ADN |
Conditii de depozitare
Produsul este livrat cu gheață carbonică și poate fi păstrat la -25~-15℃ timp de 2 ani.
Instrucțiuni
1. ReacțieSistem
| Componente | Volumul (μL) | Concentrarea finală |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Amestecul de amorsare (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Amestecul sondei (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Colorant de referință Rox | 0,5 | 1× |
| ADN șablon/ADNc | 1-10 | - |
| ddH2O | pana la 25 | - |
Note:Amestecați bine înainte de utilizare pentru a evita bulele excesive de la agitarea puternică.
A.Concentrația primerului: Primer Mix conține mai multe perechi de primeri, de obicei fiecare primer la o concentrație finală de 0,2 μmol/L și poate fi, de asemenea, ajustat între 0,1 și 0,5 μmol/L, după caz.
b.Concentrația sondei: Probe Mix conține mai multe sonde cu semnale de fluorescență diferite, iar concentrația fiecărei sonde poate fi ajustată între 50 și 250 nmol/L în funcție de situația specifică.
1.Referință colorant Rox: este utilizat pe instrumentele de amplificare PCR în timp real, cum ar fi Applied Biosystems, pentru a corecta eroarea semnalului de fluorescență generat între godeuri;acest produs nu conține referință de colorant Rox.Cas#10200 este recomandat dacă este necesar.
2.Diluarea șablonului: qPCR este foarte sensibil și se recomandă diluarea șablonului pentru utilizare.Dacă șablonul este o soluție stoc de ADNc, volumul șablonului nu trebuie să depășească 1/10 din volumul total.
3.Sistem de reacție: 25μL, 30μL sau 50μL sunt recomandate pentru a asigura eficacitatea și repetabilitatea amplificării genei țintă.
4.Pregătirea sistemului: Vă rugăm să vă pregătiți în bancul super curat și să utilizați vârfurile și tuburile de reacție fără reziduuri de nuclează;se recomanda folosirea varfurilor cu cartuse filtrante.Evitați contaminarea încrucișată și contaminarea cu aerosoli.
2.Program de reacție
| Pasul de ciclu | Temp. | Timp | Cicluri |
| Initial-denaturare | 95 ℃ | 5 minute | 1 |
| Denaturarea | 95 ℃ | 15 sec | 45 |
| Recoacere/Extindere | 60 ℃ | 30 sec |
Note:
1.Recoacere/Extindere: Temperatura și timpul pot fi ajustate corespunzător în funcție de valoarea Tm de grund proiectată.
2.Achiziția semnalului de fluorescență: timpul de achiziție a semnalului de fluorescență necesar pentru diferite instrumente de detectare qPCR este diferit, vă rugăm să setați în funcție de limita de timp minimă.Ora mai multor instrumente comune este stabilită după cum urmează:
20 sec: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec: Applied Biosystems 7300
32 sec: Applied Biosystems 7500
Note
Vă rugăm să purtați EIP necesar, cum ar fi halatul de laborator și mănuși, pentru a vă asigura sănătatea și siguranța!
