Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Cat No: HCB5145A
Kitul de sondă RT-qPCR Multiplex One Step (UDG Plus) este un kit PCR cantitativ multiplex bazat pe ARN ca șablon.În procesul experimentului, s-au efectuat transcripție inversă și PCR cantitativă în același tub, ceea ce a simplificat operația experimentală și a redus riscul de contaminare.În acest kit, prima catenă de ADNc a fost sintetizată eficient prin Reverse Transcriptază rezistentă la căldură și amplificată cantitativ cu HotStart Tag DNA Polymerase.Kitul conține în principal tampon MP optimizat, amestec de enzime etc. Soluția tampon conține deja Mg2+și dNTP.În plus, se adaugă factorii care pot inhiba eficient amplificarea nespecifică PCR și pot îmbunătăți eficiența de amplificare a mai multor reacții qPCR, ceea ce poate asigura eficiența amplificării și poate efectua o reacție de amplificare multiplă.Sistemul dUTP/UDG a fost adăugat pentru a preveni eficient riscul contaminării cu aerosoli.
Componente
1. Tampon
2. Amestecul de enzime
Specificație
| Hot Start | Pornire la cald încorporată |
| Metoda de detectare | Detectare amorsare-sondă |
| Metoda PCR | RT-qPCR într-un pas |
| Polimeraza | Taq ADN polimeraza |
| Tipul eșantionului | ADN |
Conditii de depozitare
Produsul este livrat cu gheață carbonică și poate fi păstrat la -25~-15℃ timp de 1 an.Ar trebui să evite frecventîngheț-dezgheț.Se recomandă să salvați separat.
Instrucțiuni
1.Reacţie Sistem
| Componente | Volumul (μL) | Concentrarea finală |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Amestecul de enzime | 1 | - |
| Amestec primer/sondă (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| ARN șablon | 1-10 | - |
| H2O fără RNază | la 25 | - |
Note:
Asigurați-vă că amestecați bine înainte de utilizare, evitați bulele excesive cauzate de vibrații violente.
A.Concentrația primerului: Amestecul de primer, inclusiv primer multiplex, în funcție de situație concentrația optimă a primerului poate între 0.l și 1.0μM.
b.Concentrația sondei: Amestecul sondei care include grupul fluorescent de diferență de etichetare a sondei multiplex, în funcție de situație, concentrația optimă a sondei poate între 0,05 și 0,5μM.
c.Diluarea șablonului: qPCR este foarte sensibil și se recomandă diluarea șablonului.Valoarea Ct de control este potrivită între 20 și 35.
d.Pregătirea sistemului: Vă rugăm să pregătiți în masa de lucru ultra-curată, pipeta și tubul de reacție fără reziduuri de nuclează;se recomanda folosirea capului pistolului cu element de filtru.Evitați contaminarea încrucișată și contaminarea cu aerosoli.
2. Ciclism optimizatProtocol
| Ciclu Etapa | Temp. | Timp | Cicluri |
| Transcriere inversă | 50℃A | 20 de minute | 1 |
| Initial-denaturare | 95℃ | 5 minute | 1 |
| Reacția de amplificare | 95℃ | 15 sec |
40-45 |
| 60℃ b | 30 sec c |
Note:
A.Transcriere inversă: temperatura poate selecta 42°C sau 50°C.
b.Reacția de amplificare: Temperatura este ajustată în funcție de valoarea Tm a primerilor proiectați.
c.Achiziția semnalului de fluorescență: Vă rugăm să setați procedura experimentală în conformitate cu cerințele manualului instrumentului.
Note
Vă rugăm să purtați EIP-ul necesar, cum ar fi halat de laborator și mănuși, pentru a vă asigura sănătatea și siguranța.
