Rnase A
Ribonucleaza A (RNaseA) este o polipeptidă monocatenară care conține 4 legături disulfurice cu o greutate moleculară de aproximativ 13,7 kDa.RNaza A este o endoribonuclează care degradează în mod specific ARN monocatenar la resturile C și U.Mai precis, clivajul recunoaște legătura fosfodiester formată de 5′-riboza unei nucleotide și gruparea fosfat de pe 3′-riboza nucleotidei pirimidinice adiacente, astfel încât fosfații 2, 3′-ciclici sunt hidrolizați la 3 corespunzătoare. ′nucleozidi fosfați (de exemplu, pG-pG-pC-pA-pG este scindat de RNaza A pentru a genera pG-pG-pCp și A-PG).RNaza A este cea mai activă în scindarea ARN monocatenar.Concentrația de lucru recomandată este de 1-100μG/mL, compatibilă cu diferite sisteme de reacție.Concentrația scăzută de sare (0-100 mM NaCI) poate fi utilizată pentru a tăia ARN monocatenar, ARN dublu catenar și lanțuri de ARN formate prin hibridizarea ARN-ADN.Cu toate acestea, la concentrație mare de sare (≥0,3 M), RNaza A scindează în mod specific doar ARN-ul monocatenar.
RNaza A este cel mai frecvent utilizată pentru a elimina ARN-ul în timpul preparării ADN-ului plasmidic sau ADN-ului genomic. Indiferent dacă DNaza este activă sau nu în timpul procesului de preparare, poate afecta cu ușurință reacția.Metoda tradițională de fierbere într-o baie de apă poate fi folosită pentru a inactiva activitatea ADNazei.Acest produs nu conține DNază și protează și nu necesită tratament termic înainte de utilizare.În plus, acest produs poate fi utilizat și în experimente de biologie moleculară, cum ar fi analiza protecției RNazelor și analiza secvenței ARN.
Conditii de depozitare
Produsul poate fi depozitat la -25~-15℃, valabil 2 ani.
Instrucțiuni
Aceasta este una dintre metodele comune pentru prepararea soluției de depozitare a RNază A.Poate fi pregătit și dealte metode conform metodelor tradiționale din laborator sau literatura de referință (cum ar fidizolvarea directă în soluție 10 mM Tris-HCI, pH 7,5 sau Tris-NaCl)
1. Utilizați 10 mM acetat de sodiu (pH 5,2) pentru a prepara 10 mg/mL de soluție de depozitare de RNază A
2. Încălzire la 100 ℃ timp de 15 minute
3. Se răcește la temperatura camerei, se adaugă 1/10 volum de Tris-HCI 1 M (pH 7,4), se ajustează pH-ul la 7,4 (pentrude exemplu, adăugați 500 ml de soluție de depozitare RNază 10 g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Subambalat la -20℃ pentru depozitare congelată, care poate fi stabilă până la 2 ani.
[Note]: Când se fierbe soluția de RNazăA în condiții neutre, se va forma precipitarea RNază;Se fierbe la un pH mai mic, iar dacă sunt precipitații se pot observa, care pot fi cauzate de prezența impurităților proteice.Dacă sedimentele sunt găsite după fierbere, impuritățile pot fi îndepărtate prin centrifugare de mare viteză (13000 rpm) și apoi subambalate pentru depozitare la congelare.
Informații despre produs
| Sinonime | Ribonucleaza I;ribonuclează pancreatică;Ribonucleaza 3'-pirimidnooligonucleotidohidrolază;Rnaza A;Endoribonulceza I |
| CAS Nr. | 9001-99-4 |
| Aspect | Pulbere albă liofilizată |
| Greutate moleculară | ~ 13,7 kDa (secvență de aminoacizi) |
| Valoare PH | 7.6 (interval de activitate 6-10) |
| Temperatura potrivita | 60℃ (interval de activitate 15-70℃) |
| Agent de activare | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Inhibitor de Rnaza |
| Metoda de inactivare | Nu se poate inactiva prin încălzire, se recomandă utilizarea coloanei centrifuge |
| Origine | Bovin |
| Solubilitate | Solubil în apă (10 mg/ml) |
| Pierdere pe uscat | ≤5,0% |
| Activitatea enzimatică | ≥60 unități Kunitz/mg |
| Punct izoelectric | 9.6 |
Note
Pentru siguranța și sănătatea dumneavoastră, vă rugăm să purtați halate de laborator și mănuși de unică folosință pentru operare.
