RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Acest produs conține tampon de reacție, amestec de enzime RT (ADN polimerază Bst și transcriptază inversă rezistentă la căldură), protectori liofilizați și componente colorante cromogenice.Pentru utilizare, utilizați doar tampon, enzima de reacție și primerul sunt amestecate și adăugate la șablon;adăugarea de protector liofilizat poate fi directă.A fost conectat la un liofilizator și liofilizat și numai amorsele și șabloanele au fost adăugate atunci când sunt utilizate.Acest kit oferă o detectare vizuală rapidă și clară a amplificării, care reacție negativă este indicată în roșu, iar reacția pozitivă este indicată printr-o schimbare în galben.
Componentă
| Componentă | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Tampon de amplificare mediat de buclă (cu colorant) | 0,96 ml | 4,80 ml×2 | 9,60 ml×10 |
| RT-Amestec de enzime | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 ml×10 |
| Protector liofilizat | 0,96 ml×2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
Aplicații
Pentru amplificarea izotermă ADN sau ARN.
Conditii de depozitare
Transportat cu gheață carbonică, depozitat la -25~ -15℃.Evitați înghețarea-dezghețarea frecventă, produsul este valabil 12 luni.
Protocol
1.Se decongela tamponul de reacție care urmează să fie utilizat la temperatura camerei.Vortexați scurt sau răsturnați tuburile de mai multe ori pentru a amesteca bine, apoi centrifugeți pentru a colecta lichidul pe fundul tubului.
2.Pregătirea sistemului de reacție.Acest reactiv poate fi preparat în două sisteme de reacție, amestec de reacție lichid și amestec de sistem liofilizat.
1) Pregătiți amestecul de reacție lichid
| Componentă | Volum |
| Tampon de amplificare mediat de buclă (cu colorant) | 10 μL |
| RT-Amestec de enzime | 2,8 μL |
| 10 × amestec de amorsarea | 5 μL |
| Șabloane ADN/ ARN b | × μL |
| Apă fără nucleaze | Până la 50 μL |
2) Mix de sistem de liofilizare
① Pregătiți amestecul liofilizat
| Componentă | Volum |
| Tampon de amplificare mediat de buclă (cu colorant) | 10 μL |
| Protector liofilizat | 20 μL |
| RT-Amestec de enzime | 2,8 μL |
| Apă fără nucleaze | Până la 50 μL |
② Liofilizare: Amestecul preparat a fost liofilizat într-un sistem de 50μL
③ Pregătiți amestecul de reacție
| Componentă | Volum |
| Amestecul liofilizat | 1 bucata |
| 10 × amestec de amorsarea | 5 μL |
| Șabloane ADN/ ARN b | × μL |
| Apă fără nucleaze | Până la 50 μL |
Note:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (solubil în apă) este recomandat pentru templ acid nucleic.
1.Se incubează la 65°C timp de 30-45 minute, care poate fi prelungit corespunzător în funcție de schimbarea culorii Timp de reacție.
2.Potrivit cu ochiul liber, galbenul a fost pozitiv și roșul a fost negativ.
Note
1.Sarea poate apărea în fundul tubului tampon, agitați scurt sau răsturnați tuburile de mai multe ori pentru a amesteca bine la temperatura camerei.
2.Temperatura de reacție poate fi optimizată între 62 ℃ și 68 ℃ în funcție de starea primerilor.
3.Reactivii ambalați nu trebuie expuși la aer pentru o perioadă lungă de timp.
4.Reacția de decolorare roșie și galbenă depinde de modificarea pH-ului sistemului de reacție, vă rugăm să nu utilizați soluția de depozitare a acidului nucleic Tris care conține, recomandată utilizarea ddH2O acid nucleic stocat;
5.Experimentul ar trebui să fie standardizat, inclusiv pregătirea sistemului de reacție, liofilizarea și procesarea probei și procesul de adăugare a probei;
6.Pentru a evita contaminarea, se recomandă pregătirea sistemului de reacție într-o bancă ultra-curată, în alte Adăugați șabloane la hota camerei pentru a evita interferența fals pozitivă.
