2×HiF Taq plus Master Mix
Cat Nr: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (cu colorant) este o soluție gata de utilizare 2×premixată care conține Plus HIF ADN polimerază, dNTP și tampon optimizat.Doi anticorpi monoclonali la temperatura camerei care inhibă activitatea polimerazei și activitatea 3′→5′exonucleazei sunt adăugați la amestecul principal pentru PCR cu pornire la cald ușor și foarte specifică.Factorul de extensie este adăugat la mixul principal pentru a da enzimei o capacitate de amplificare a fragmentelor lungi, lungimea amplificării poate fi de până la 13 kb, enzima are o activitate de ADN polimerază 5′→3′ și o activitate de 3′→5′. Activitatea exonucleazei, fidelitatea sa este de 83 de ori mai mare decât a ADN-polimerazei Taq, care este de 9 ori mai mare decât a ADN-polimerazei obișnuite.Este potrivit pentru amplificarea șabloanelor complexe, produsul de amplificare este un capăt tocit.
2×HIF Taq plus Master Mix (cu colorant) are avantajele rapid și ușor, sensibilitate ridicată, specificitate puternică, stabilitate bună etc., sistemul de reacție trebuie doar să adauge primeri și șabloane și poate fi amplificat cu două protocol de pas, simplificând etapele experimentale și economisind timp.Acest produs conține coloranți indicatori de electroforeză, iar produsele PCR pot fi utilizate direct pentru electroforeză.În plus, produsul conține și un agent de protecție specific, astfel încât amestecul principal să își poată menține o activitate stabilă după îngheț-dezgheț repetat.
Conditii de depozitare
Produsele trebuie depozitate la -25~-15℃ timp de 1 an.
Specificații
| Specificatiile produsului | Master Mix |
| Concentraţie | 2× |
| Hot Start | Pornire la cald încorporată |
| surplontă | Bont |
| Viteza de reactie | Rapid |
| Dimensiune (produs final) | Până la 13 kb |
| Conditii de transport | Gheata uscata |
| Tip produs | Premixuri PCR de înaltă fidelitate |
Instrucțiuni
1.Sistem de reacție PCR
| Componente | Volumul (μL) |
| Șablon ADN | Potrivit |
| Primer direct (10 μmol/L) | 2.5 |
| Primer invers (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | la 50 |
2.Utilizarea recomandată a diferitelor șabloane
| Tip de șablon | Amplifică fragmentele de la 1 kb la 10 kb |
| ADN genomic | 50ng-200ng |
| ADN plasmid sau viral | 10pg-20ng |
| cADN | 1-2,5 µL (Nu depășiți 10% din volumul final de reacție PCR) |
3.Protocol de amplificare
1) Protocol în doi pași (șablon de complexitate)
| Pasul de ciclu | Temp. | Timp | Cicluri |
| Denaturarea inițială | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturarea | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
| Extensie | 68℃ | 30 sec/kb | |
| Prelungire finală | 72℃ | 5 minute | 1 |
2) Protocol în trei pași (protocol obișnuit)
| Pasul de ciclu | Temp. | Timp | Cicluri |
| Denaturarea inițială | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturarea | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
| Recoacerea | 60℃ | 20 sec | |
| Extensie | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Prelungire finală | 72℃ | 5 minute | 1 |
3) Protocolul gradient de recoacere (șablon de complexitate)
| Pasul de ciclu | Temperatura | Timp | Cicluri |
| Denaturarea inițială | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturarea | 98℃ | 10 sec | 15 (1℃ reducere pe ciclu) |
| Recoacere gradient | 70-55℃ | 20 sec | |
| Extensie | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Denaturarea | 98℃ | 10 sec |
20 |
| Recoacerea | 55℃ | 20 sec | |
| Extensie | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Prelungire finală | 72℃ | 5 minute | 1 |
Caracteristici sub alt protocol de amplificare
| Protocol | Doi pasi | În trei pași | Recoacere gradient |
| Spec. | rapid | mediu | încet |
| Specificitate | înalt | mediu | înalt |
| Randamentul PCR | mediu | înalt | mediu |
| Rata de detectare | înalt | mediu | înalt |
Note
Vă rugăm să purtați EIP-ul necesar, cum ar fi halatul de laborator și mănuși, pentru a vă asigura sănătatea și siguranța!
