Hotstart Taq ADN polimerază
Hot Start Taq DNA Polymerase (modificarea anticorpului) este o ADN polimerază termostabilă cu pornire la cald de la Thermus aquaticus YT-1, care posedă o activitate de polimerază 5′→3′ și o activitate de endonuclează cu clapă de 5′.ADN polimeraza Taq cu pornire la cald este o ADN polimerază Taq care a fost modificată de anticorpi Taq termolabili.Modificarea anticorpilor a crescut specificitatea, sensibilitatea și randamentul PCR.
Componente
| Componentă | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 ml | 4×10 ml | 4×50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (modificat cu anticorpi) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 ml |
Aplicații
10 mM Tris-HCI (pH 7,4 la 25°C), 100 mM KCI, 0,1 mM EDTA, 1 mM ditiotreitol, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 şi 50% glicerol.
Starea de depozitare
Transport sub 0°C și păstrat la -25°C~-15°C.
Definiția unității
O unitate este definită ca cantitatea de enzimă care încorporează 15 nmol de dNTP în material insolubil în acid în 30 de minute la 75°C.
Control de calitate
1.EndActivitatea onucleazei:Incubarea a 20 U de enzimă cu 4 μg ADN pUC19 timp de 4 ore la 37 ℃ nu a dus la o degradare detectabilă a ADN-ului, așa cum s-a determinat prin electroforeză pe gel.
2.5 kb Lambda PCR:25 de cicluri de amplificare PCR a 5 ng ADN Lambda cu 1,25 unități de Taq ADN polimerază în prezența a 200 uM dNTP-uri și 0,2 uM primeri rezultă în produsul așteptat de 5 kb.
3.Activitatea exonucleazei:Incubarea unei reacții de 50 ui care conține minimum 12,5 U de Taq ADN polimerază cu 10 nmol de oligonucleotidă 5'-FAM timp de 30 de minute la 37°C nu produce nicio degradare detectabilă.
4.Activitatea RNazelor:Incubarea a 10 uL de reacție care conține 20 U de enzimă cu 1 ug de transcripte de ARN timp de 2 ore la 37°C nu a dus la nicio degradare detectabilă a ARN determinată prin electroforeză pe gel.
5.Inactivarea căldurii:Nu.
Sistem de reacție
| Componente | Volum |
| ADN șablona | opțional |
| Primer Forward 10 μM | 0,5 μL |
| Grund invers 10 μM | 0,5 μL |
| dNTP Mix (10 mM fiecare) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq ADN polimerazab(5U/μL) | 0,125 μL |
| Apă fără nucleaze | Până la 25 μL |
Note:
1) a.
| ADN | Cantitate |
| genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid sau Viral | 1 pg-1 ng |
2) b.Concentrația optimă de ADN polimerază Taq poate varia de la 5-50 unități/ml (0,1-0,5 unități/reacție 25 µL) în aplicații specializate.
Protocol de ciclism termic
PCR
| Etapa | Temperatura(°C) | Timp | Cicluri |
| Denaturarea inițialăa | 95 ℃ | 1-3 minute | - |
| Denaturarea | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cicluri |
| Recoacereab | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Extensie | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Prelungire finală | 68 ℃ | 5 minute | - |
Note:
1) O denaturare inițială de 1 min la 95°C este suficientă pentru majoritatea amplificărilor.Pentru șabloane dificile, se recomandă o denaturare mai lungă de 2-3 minute la 95°C.Cu PCR de colonie, se recomandă o denaturare inițială de 5 minute la 95°C.
2) Etapa de recoacere este de obicei de 15-60 s.Temperatura de recoacere se bazează pe Tm perechii de primer și este de obicei 45-68℃.
