Kit de genotipizare a mouse-ului

Cat Nr: HCR2021A

Acest produs este un kit conceput pentru identificarea rapidă a genotipurilor de șoarece, inclusiv extracția ADN brut și sistemul de amplificare PCR.Produsul poate fi utilizat pentru amplificarea PCR direct din coada șoarecelui, ureche, deget de la picioare și alte țesuturi după scindarea simplă de către tampon de liză și proteinază k.Fără digestie peste noapte, extracție cu fenol-cloroform sau purificare pe coloană, ceea ce este simplu și scurtează timpul de experimente.Produsul este potrivit pentru amplificarea fragmentelor țintă de până la 2 kb și a reacțiilor PCR multiplex cu până la 3 perechi de primeri.Mixul 2×Mouse Tissue Direct PCR contine ADN polimeraza modificata genetic, Mg²⁺, dNTP și un sistem tampon optimizat pentru a oferi o eficiență ridicată de amplificare și toleranță la inhibitor, astfel încât reacțiile PCR să poată fi efectuate prin adăugarea de șablon și primeri și rehidratarea produsului la 1×.Produsul PCR amplificat cu acest produs are o bază „A” proeminentă la capătul 3′ și poate fi utilizat direct pentru clonarea TA după purificare.

Componente

Conditii de depozitare

Produsele trebuie depozitate la -25~-15℃ timp de 2 ani.După dezghețare, Lysis Buffer poate fi păstrat la 2 ~ 8℃ pentru utilizare multiplă pe termen scurt și se amestecă bine atunci când este utilizat.

Aplicație

Acest produs este potrivit pentru analiza knockout la șoarece, detectarea transgenică, genotiparea și așa mai departe.

Caracteristici

1.Operare simplă: nu este nevoie de extragerea ADN-ului genomic;

2.Aplicație largă: potrivit pentru amplificarea directă a diferitelor țesuturi de șoarece.

Instrucțiuni

1.Eliberarea de ADN genomic

1) Prepararea lizatului

Lizatul de țesut este preparat în funcție de numărul de probe de șoarece care urmează să fie lizate (lizatul de țesut trebuie preparat la fața locului în funcție de dozare și amestecat bine pentru utilizare), iar proporția de reactivi necesară pentru o singură probă este următoarea:

2) Prepararea probei și liza

Utilizarea recomandată a țesuturilor

Luați o cantitate adecvată de mostre de țesut de șoarece în tuburi de centrifugă curate, adăugați 200 μL de lizat de țesut proaspăt în fiecare tub de centrifugă, agitați și agitați, apoi incubați la 55 ℃ timp de 30 de minute, apoi încălziți la 98 ℃ timp de 3 minute.

3) Centrifugarea

Se agită bine lizatul și se centrifughează la 12.000 rpm timp de 5 minute.Supernatantul poate fi utilizat ca șablon pentru amplificarea PCR.Dacă șablonul este necesar pentru depozitare, transferați supernatantul într-un alt tub de centrifugă steril și păstrați la -20℃ timp de 2 săptămâni.

2.Amplificare PCR

Îndepărtați amestecul de 2×Mouse Tissue Direct PCR de la -20℃ și dezghețați-l pe gheață, amestecați cu capul în jos și pregătiți sistemul de reacție PCR conform următorului tabel (operați pe gheață):

Notă:

a) Cantitatea adăugată nu trebuie să depășească 1/10 din sistem, iar dacă se adaugă prea mult, amplificarea PCR poate fi inhibată.

Condiții PCR recomandate

Notă:

a) Temperatura de recoacere: Cu referire la valoarea Tm a grundului, se recomandă setarea temperaturii de recoacere la valoarea Tm mai mică a grundului +3~5℃.

Probleme și soluții comune

1.Fără benzi vizate

1) Produs de liză în exces.Alegeți cea mai potrivită cantitate de șablon, de obicei nu mai mult de 1/10 din sistem;

2) Dimensiunea eșantionului prea mare.Se diluează lizatul de 10 ori și apoi se amplifică sau se reduce dimensiunea probei și se re-liză;

3) Probele de țesut nu sunt proaspete.Se recomandă utilizarea probelor de țesut proaspăt;

4) Calitate slabă a grundului.Utilizați ADN-ul genomic pentru amplificare pentru a verifica calitatea primerului și a optimiza designul primerului.

2.Amplificare nespecifică

1) Temperatura de recoacere este prea scăzută și numărul ciclului este prea mare.Creșteți temperatura de recoacere și reduceți numărul de cicluri;

2) Concentrația șablonului este prea mare.Reduceți cantitatea de șablon sau diluați șablonul de 10 ori după amplificare;

3) Specificitate slabă a primerului.Optimizați designul grundului.

Note

1.Pentru a evita contaminarea încrucișată între probe, trebuie pregătite mai multe instrumente de prelevare a probelor, iar suprafața instrumentelor poate fi curățată cu soluție de hipoclorit de sodiu 2% sau cu soluție de curățare cu acid nucleic după fiecare prelevare, dacă este necesară utilizarea repetată.

2.Se recomandă utilizarea de țesuturi proaspete de șoarece, iar volumul de eșantionare nu trebuie să fie prea mare pentru a evita afectarea rezultatelor amplificării.

3.Lysis Buffer ar trebui să evite înghețul-dezghețul frecvent și poate fi păstrat la 2 ~ 8℃ pentru utilizare multiplă pe termen scurt.Dacă este păstrat la temperatură scăzută, pot apărea precipitații și trebuie dizolvate complet înainte de utilizare.

4.Amestecul PCR ar trebui să evite înghețul-dezghețul frecvent și poate fi păstrat la 4℃ pentru utilizare repetată pe termen scurt.

5.Acest produs este destinat numai cercetării științifice experimentale și nu trebuie utilizat în diagnostic sau tratament clinic.