One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Cat Nr: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix este pentru cuantificarea fluorescenței pe baza colorantului SYBR Green I.Folosind primeri specifici genei, transcripția inversă și reacțiile qPCR sunt finalizate într-un singur tub, eliminând necesitatea operațiunilor repetate de deschidere a capacului și pipetare, îmbunătățind considerabil eficiența testului și reducând riscul de contaminare.Pentru probele de ARN, trusa folosește Reverse Transcriptaza rezistentă la căldură pentru sinteza eficientă a ADNc și HotStart Taq DNA Polymerase pentru amplificare cantitativă.În cadrul sistemului tampon optimizat, sensibilitatea kitului poate fi de până la 0,1 pg pentru ținte cu exprimare ridicată și până la 1 pg pentru ținte cu exprimare moderată.Kitul este potrivit pentru amplificarea și cuantificarea probelor de ADN.Permite detectarea și cuantificarea sensibilă a acizilor nucleici din diferite probe de plante și animale, celule și microorganisme.
Componente
| No | Nume | Volum | Volum |
| 1 | Buffer avansat | 250 μL | 2 × 1,25 ml |
| 2 | Amestecul avansat de enzime | 20 μL | 200 μL |
| 3 | H. fără RNază2O | 250 μL | 2 × 1,25 ml |
Conditii de depozitare
Acest produs trebuie păstrat la -25~-15℃ ferit de lumină timp de 1 an.
Instrucțiuni
1.Configurarea sistemului de reacțied
| Componente | Volumul (μL) | Volumul (μL) | Concentrarea finală |
| Buffer avansat | 12.5 | 25 | 1× |
| Amestecul avansat de enzime | 1 | 2 | - |
| Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Primer invers (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Tamplar ARNb | X | X | - |
| H. fără RNază2Oc | la 25 | la 50 | - |
Note:
1) a.TConcentrația finală a primerului a fost de 0,2 μmol/L, care poate fi, de asemenea, ajustată între 0,1 și 1 μmol/L, după caz.
2) b.Reactivul este extrem de sensibil, cu ARN total în intervalul 1pg-1μg, iar testarea probelor umane a arătat o intrare optimă de 1 pg-100 ng, controlând o valoare globală Ct în intervalul 15-30, după caz.
3) c.Se recomandă utilizarea a 20μL sau 50μL pentru a asigura validitatea și reproductibilitatea amplificării genei țintă.
4) d.Vă rugăm să vă pregătiți în bancul ultra-curat și să utilizați vârfuri și tuburi de reacție fără reziduuri de nuclează;se recomanda varfuri cu cartuse filtrante.Evitați contaminarea încrucișată și contaminarea cu aerosoli.
2.Program de reacție
| Pasul de ciclu | Temp. | Timp | Cicluri |
| Transcriere inversă | 50℃a | 6 minute | 1 |
| Denaturarea inițială | 95℃ | 5 minute | 1 |
| Reacția de amplificare | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 60℃b | 30 sec | ||
| Etapa curbei de topire | Valori implicite ale instrumentului | 1 | |
Note:
1) a.Temperatura de transcriere inversă poate fi selectată între 50-55°C în funcție de nevoile experimentale.Pentru probele de ADN, procesul de transcriere inversă poate fi omis.
2) b.În cazuri speciale temperatura de recoacere/extindere poate fi ajustată în funcție de valoarea amorsului Tm, se recomandă 60°C.
Note
1. Acest produs este destinat exclusiv cercetării.
2. Vă rugăm să operați cu halate de laborator și mănuși de unică folosință, pentru siguranța dumneavoastră.
