Inhibitor de rnază (fără glicerol)
Inhibitorul de RNază murină este un inhibitor de RNază murină recombinant exprimat și purificat din E.coli.Se leagă de RNaza A, B sau C într-un raport de 1:1 prin legături necovalente, inhibând astfel activitatea celor trei enzime și protejând ARN-ul de degradare.Cu toate acestea, nu este eficient împotriva RNază 1, RNază T1, nuclează S1, RNază H sau RNază de la Aspergillus.Inhibitorul de RNază murină a fost testat prin RT-PCR, RT-qPCR și ARNm IVT și a fost compatibil cu diferite transcriptaze inverse, ADN polimeraze și ARN polimeraze comerciale.
În comparație cu inhibitorii de RNază umani, inhibitorul de RNază murin nu conține două cisteine care sunt foarte sensibile la oxidare care determină inactivarea inhibitorului.Acest lucru îl face stabil la concentrații scăzute de DTT (mai puțin de 1 mM).Această caracteristică îl face potrivit pentru utilizarea în reacții în care concentrațiile mari de DTT sunt negative pentru reacție (de exemplu, RT-PCR în timp real).
Aaplicație
Acest produs poate fi utilizat pe scară largă în orice experiment în care interferența RNază este posibilă pentru a evita degradarea ARN, cum ar fi:
1. Sinteza cADN-ului prima catenă, RT-PCR, RT-qPCR etc.;
2. Protejați ARN-ul de degradare în transcripție/traducere in vitro (de exemplu, replicare virală in vitro);
3.Inhibarea activității RNazelor în timpul izolării și purificării ARN.
Conditii de depozitare
A se păstra la -25～-15℃;
Cicluri de îngheț-dezgheț ≤ 5 ori;
Valabil 1 an.
Definiția unității
O unitate este definită ca cantitatea de inhibitor de RNază necesară pentru a inhiba activitatea a 5 ng de RNază A cu 50%.
Greutate moleculară
Inhibitorul de RNază (fără glicerol) este o proteină de 50 kDa.
Control de calitate
Exonucleaza Activitate:
Incubarea a 40 U de enzimă cu 1 μg ADN de digerare λ-Hind III timp de 16 ore la 37°C nu a dus la nicio degradare detectabilă a ADN-ului determinată prin electroforeză pe gel.
Activitatea endonucleazei:
Incubarea a 40 U de enzimă cu 1 μg λ ADN timp de 16 ore la 37°C nu a dus la nicio degradare detectabilă a ADN-ului determinată prin electroforeză pe gel.
Nicking Activitate:
Incubarea a 40 U de enzimă cu 1 μg pBR322 timp de 16 ore la 37 ℃ nu a dus la nicio degradare detectabilă a ADN-ului, determinată prin electroforeză pe gel.
RNază Activitate:
Incubarea a 40 U de enzimă cu 1,6 μg MS2 ARN timp de 4 ore la 37℃ nu a dus la o degradare detectabilă a ARN determinată prin electroforeză pe gel.
E.coli ADN:
40 U de enzimă sunt detectate prin qPCR TaqMan.ADN-ul E.coli este ≤ 0, 1pg/40U.
Notes
1.Nu agitați sau amestecați violent pentru a preveni inactivarea enzimelor.
2.Inhibitorul de RNază este activ la temperaturi cuprinse între 25℃ și 55℃ și este inactivat la ≥65℃.
3. Activitatea RNazei H, RNazei 1 și RNazei T1 nu este inhibată.
4. Intervalul de pH pentru inhibarea activității RNazei este larg (activ la pH 5-9), prezentând activitate maximă la pH 7-8.
