Enzime UDG/UNG
UDG (uracil ADN glicozilaza) poate cataliza hidroliza legăturii N-glicozidice dintre baza uracilului și scheletul zahăr-fosfat în ssDNA și dsDNA.Poate controla cu ușurință poluarea cu aerosoli și este potrivit pentru sistemele comune de biologie moleculară, cum ar fi PCR, qPCR, RT-qPCR și LAMP.
Specificații
| Gazdă de expresie | E. coli recombinantă cu gena ADN glicozilazei uracilului |
| Greutate moleculară | 24. 8kDa |
| Puritate | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inactivarea căldurii | 95℃, 5~10 min |
| Definiția unității | O unitate (U) este definită ca cantitatea de enzimă necesară pentru catalizarea hidrolizei dsDNA care conține 1 μg dU în 30 de minute la 25℃. |
Depozitare
Produsul trebuie păstrat la -25℃~-15°C timp de doi ani.
Instrucțiuni
1.Prepararea amestecului de reacție PCR conform următorului sistem
| Componente | Volumul (μL) | Concentrarea finală |
| 10 × tampon PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Lease |
| ADN șablon | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq ADN polimerază (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil ADN glicozilază (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Pana la 50 | - |
Notă: Conform cerințelor experimentale, concentrația finală de dUTP poate fi ajustată între 0,2-0,6 mmol/L și 0,2 mmol/L dTTP poate fi adăugat selectiv.
2.Procedura de amplificare
| Pasul de ciclu | Temperatura | Timp | Cicluri |
| Degradarea șablonului care conține dU | 25℃ | 10 minute | 1 |
| Activarea UDG, denaturarea inițială a șablonului | 95℃ | 5 ~ 10 minute | 1 |
| Denaturarea | 95℃ | 10 sec |
30-35 |
| Recoacerea | 60℃ | 20 sec | |
| Extensie | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Prelungire finală | 72℃ | 5 minute | 1 |
Notă: Timpul de reacție la 25°C poate fi ajustat în 5-10 minute conform cerințelor experimentale.
Note
1.UDG este activ în majoritatea tampoanelor de reacție PCR.
2.Enzimele trebuie păstrate într-o cutie de gheață sau pe o baie de gheață atunci când sunt utilizate și trebuie păstrate la -20°C imediat după utilizare.
3.Vă rugăm să purtați EIP necesar, cum ar fi halatul de laborator și mănuși, pentru a vă asigura sănătatea și siguranța!
